ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？解決方法是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么你知道ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？解決方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、高背景或陰性對(duì)照只偏高

原因：

1. 陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照貨樣品污染

2. 抗體非特異性結(jié)合

3. 酶結(jié)合物過(guò)濃

4. 孵育溫度過(guò)高

解決方法：

1. 洗滌是，勿將洗液溢出孔外

2. 封閉液不合適，更換封閉液

3. 請(qǐng)檢查酶結(jié)合物是否按說(shuō)明書(shū)規(guī)定稀釋

4. 檢查孵育箱的溫度是否正確、穩(wěn)定

二、標(biāo)準(zhǔn)曲標(biāo)準(zhǔn)曲線良好，但樣本無(wú)檢測(cè)信號(hào)

原因：

1. 樣本中無(wú)檢測(cè)物或檢測(cè)無(wú)含量極低

2. 樣本中其它物質(zhì)影響/掩蓋檢測(cè)

3. 樣本中檢測(cè)物濃度過(guò)高，HOOK效應(yīng)導(dǎo)致假低值

解決方法：

1. 設(shè)置內(nèi)參，重新實(shí)驗(yàn)

2. 作適當(dāng)稀釋，降低其它物質(zhì)的干擾，或作系列稀釋，檢測(cè)回收率

3. 適當(dāng)倍數(shù)稀釋樣本，檢測(cè)物濃度盡量在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)

三、重復(fù)性較差

原因：

1. 微孔中有氣泡

2. 試劑未混勻

3. 樣本中有雜質(zhì)或沉淀物

4. 微孔包被面被吸頭劃破

解決方法：

1. 用針尖挑破氣泡

2. 確保充分混勻試劑

3. 使用前；離心

4. 加液是小心操作

四、假陽(yáng)性反應(yīng)

原因：

1. 洗滌不充分

2. 洗板機(jī)管道堵塞

3. 加結(jié)合物是，灑在微孔邊緣

解決方法：

1. 使用前需檢查洗板機(jī)是否正常工作

2. 需經(jīng)常維護(hù)洗板機(jī)

3. 小心向微孔加入結(jié)合物，加入微孔底部中央，避免與孔壁和邊緣接觸

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