如何選擇熒光定量PCR中的對照？

對照的目的是對檢測的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控，因此我們按照檢測的流程對對照進(jìn)行梳理。那么我們應(yīng)該如何選擇熒光定量PCR中的對照呢？讓我們一起來看看吧！

一、陽性對照和陰性對照

陽性對照和陰性對照是指在相同的處理?xiàng)l件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進(jìn)行了提取和擴(kuò)增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強(qiáng)調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。

二、擴(kuò)增對照

我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴(kuò)增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準(zhǔn)確的定義應(yīng)該是擴(kuò)增陽性對照和擴(kuò)增陰性對照。擴(kuò)增陽性對照含有陽性擴(kuò)增模板，擴(kuò)增陰性對照應(yīng)含有陰性擴(kuò)增模板（基質(zhì)核酸）。擴(kuò)增對照只能監(jiān)控每次擴(kuò)增過程中的擴(kuò)增系統(tǒng)是否正常，不能監(jiān)控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢測RNA樣品的檢測試劑盒，其擴(kuò)增陽性對照使用質(zhì)粒，便無法監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄過程。

三、內(nèi)標(biāo)（Internal Control，IC）

內(nèi)標(biāo)是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點(diǎn)是與靶序列共同擴(kuò)增，而其他的對照都是獨(dú)立擴(kuò)增。

四、核酸提取對照

可以使用內(nèi)參基因，假病毒混合基質(zhì)，滅活病毒混合基質(zhì)來監(jiān)控提取到擴(kuò)增的流程。

五、反轉(zhuǎn)錄對照（RT control）

可以使用提取好的RNA內(nèi)參基因，RNA假病毒混合基質(zhì)，滅活RNA病毒混合基質(zhì)來監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄到擴(kuò)增的流程。

無反轉(zhuǎn)錄對照（no-RT control）含有除反轉(zhuǎn)錄酶以外的所有成分。

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