腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？

原代培養(yǎng)是直接從生物體組織或器官的一部分進(jìn)行培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為腫瘤研究及治療提供充足的細(xì)胞來源是癌癥在體外研究的重要工具，與體內(nèi)研究相輔相成。但目前腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率不高的許多問題還需繼續(xù)探討與研究。腫瘤組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？讓我們一起來看看吧！

注意點(diǎn)一：取材部位的選擇非常重要，應(yīng)在癌細(xì)胞集中、細(xì)胞活力較好的部位取材，盡量避免在壞死區(qū)取材；

注意點(diǎn)二：取材后應(yīng)盡快培養(yǎng)，最好不要超過24h，如需耽擱時(shí)間，可將組織塊于培養(yǎng)液中浸泡，放置于冰浴或4℃冰箱；

注意點(diǎn)三：癌組織周圍的血液、脂肪等正常的組織應(yīng)去除，可以保證癌細(xì)胞的純度；

注意點(diǎn)四：取材方法：獲取的組織塊最好能有指尖大小，太小了可能養(yǎng)不起來，因?yàn)榧?xì)胞有生物學(xué)環(huán)境，細(xì)胞多了長得也會(huì)快，如果細(xì)胞密度太低了，細(xì)胞很難長起來，可能的原因是細(xì)胞分泌的生長因子。

注意點(diǎn)五：切碎癌組織時(shí)，可用眼科剪，也可用小刀，避免用大剪刀，所用刀剪要鋒利，以免挫傷細(xì)胞。

注意點(diǎn)六：分散細(xì)胞的方法：機(jī)械和藥物兩種方法。癌組織不同與正常組織，單純用機(jī)械的剪碎辦法，癌細(xì)胞就可以游離出來，成為細(xì)胞懸液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離。如果從含有大量堅(jiān)硬的結(jié)締組織分離癌細(xì)胞，膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化，則使用膠原蛋白酶消化，如：原代黑色素瘤細(xì)胞，黑色素瘤一般長在肢端，肢端的角質(zhì)層太厚，就需要膠原蛋白酶消化。

注意點(diǎn)七：接種數(shù)量要足夠，造成培養(yǎng)細(xì)胞所必須的生物學(xué)環(huán)境；

注意點(diǎn)八：更換培養(yǎng)液的時(shí)可換半量或1/4量，將pH維持在7.2-7.4；

注意點(diǎn)九：新配試劑要做無菌實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格無菌操作，防止污染，新手建議不要直接養(yǎng)原代，先拿實(shí)驗(yàn)室的腫瘤細(xì)胞養(yǎng)養(yǎng)練練手；

注意點(diǎn)十：若組織在消化時(shí)間較長時(shí)仍未散開，可采用多次提取消化法以減少酶對(duì)已消化下來的細(xì)胞的損傷；

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