pei轉(zhuǎn)染試劑如何配置

　　pei轉(zhuǎn)染試劑廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞系包括293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 細(xì)胞等。pei轉(zhuǎn)染試劑如何配置呢？

　　一、pei轉(zhuǎn)染試劑配置前準(zhǔn)備：

　　(1)通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐阸培養(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。

　　(2)根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當(dāng)細(xì)胞貼壁完q后即可開始轉(zhuǎn)染。

　　(3)轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。

　　二、配置PEI-DNA混合物

　　以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲(chǔ)存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后于室溫靜置20-30min。

　　三、pei轉(zhuǎn)染試劑配置后細(xì)胞孵育

　　將420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動(dòng)平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。

　　注：每次用100μM的核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑儲(chǔ)存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。

　　四、pei轉(zhuǎn)染試劑配置后細(xì)胞培養(yǎng)

　　培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報(bào)告基因的表達(dá)。